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X-gal

 

外觀：白色粉末
純度（HPLC）：>；；=99％
比旋光度：[&；alpha；]20D -62º；； ±；； 2 （c=1 in DMF/H2O 1:1）
水分：&；le； 1％
溶解性：清澈溶液（2％in DMF）
儲存：4℃ 避光避潮；長期存放-20℃
儲液配制：溶解100mg X -gal 于5 mL DMF中，分裝成1ml，用鋁箔包裝避光保存。
用途：X-Gal是&；beta；-半乳糖苷酶（&；beta；-galactosidase）的顯色底物，在&；beta；-半乳糖苷酶的催化下會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物。常用于&；beta；-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。溶于DMSO，溶解度可達20mg/ml。也溶于DMF。
藍白斑篩選：
1）載體質(zhì)粒和轉(zhuǎn)化受體菌株：
實驗所使用的載體質(zhì)粒DNA為pBS,轉(zhuǎn)化受體菌為E. coli DH5&；alpha；菌株。E. coli DH5&；alpha；菌株帶有&；beta；-半乳糖苷酶C端部分序列的編碼信息。載體質(zhì)粒DNA pBS上帶有&；beta；-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調(diào)控序列和&；beta；-半乳糖苷酶N端146個氨基酸的編碼序列。（這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點,但并沒有破壞lacZ的閱讀框架,不影響其正常功能。）
在各自獨立的情況下,pBS和DH5&；alpha；編碼的&；beta；-半乳糖苷酶的片段都沒有酶活性。但在pBS和DH5&；alpha；融為一體時可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。
這種lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的&；beta；-半乳糖苷酸陰性突變體之間實現(xiàn)互補的現(xiàn)象叫&；alpha；-互補。
2）實驗用顯色方法
實驗中使用X-gal（5-溴-4氯-3-吲哚-&；beta；-D-半乳糖苷）和IPTG（異丙基硫代-&；beta；-D-半乳糖苷）而非直接使用&；beta；-半乳糖。X-gal 以及 &；beta；-半乳糖均為 &；beta；-半乳糖苷酶底物，但是不能誘導(dǎo)&；beta；-半乳糖苷酶操縱子。實驗中使用IPTG以誘導(dǎo)&；beta；-半乳糖苷酶操縱子。在&；beta；-半乳糖苷酶作用下生成深藍色產(chǎn)物